Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
PDGF-B CRISPR Activation Plasmid (r): sc-437277-ACT
- Zielspezies: rat
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PDGF-B CRISPR Activation Plasmid (r) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- PDGF-B CRISPR Aktivierungsplasmide (r) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom PDGF-B CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) und vom PDGF-B CRISPR-Aktivierungsplasmid (r2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDGF-B: sc-74494
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDGF-B CRISPR Activation Plasmid (r) | sc-437277-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
PDGF-B CRISPR Activation Plasmid (r2) | sc-437277-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Der von Thrombozyten abgeleitete Wachstumsfaktor, Untereinheit B (PDGF-B), ist ein sezerniertes Mitogen, das hauptsächlich über PDGFRβ signalisiert und dadurch während Angiogenese und Gewebeumbau die Rekrutierung, Proliferation und Migration von Perizyten und vaskulären glatten Muskelzellen reguliert. Die PDGF-B–PDGFR-Signalgebung aktiviert MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und PLCγ-Signalwege und koordiniert so Programme der Extrazellulärmatrix-Ablagerung, Chemotaxis und Wundheilung. In Rattenmodellen wird eine veränderte PDGF-B-Aktivität häufig mit vaskulärer Dysfunktion, fibrotischem Remodeling und aberranter Stromaktivierung in Verbindung gebracht, was PDGF-B zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der neurovaskulären Integrität und organspezifischer Umbauprozesse macht. Eine fehlregulierte PDGF-B-Signalgebung ist zudem relevant in proliferativen und entzündlichen Mikroumgebungen, in denen mesenchymal–endotheliale Interaktionen die krankheitsassoziierte Gewebearchitektur prägen.
PDGF-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
PDGF-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PDGF-B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PDGF-B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PDGF-B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.