PDE2A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401957-ACT

Das humane Gen **PDE2A** kodiert die Phosphodiesterase 2A, eine zyklische Nukleotid‑Phosphodiesterase mit Doppelsubstratspezifität, die **cAMP** und **cGMP** hydrolysiert und Stickstoffmonoxid‑/cGMP‑Signale mit cAMP‑abhängigen Signalwegen koppelt. Durch die Ausprägung von Gradienten zyklischer Nukleotide moduliert PDE2A die **PKA/PKG**‑Signalübertragung, die Calciumhomöostase und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme, die die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität sowie vaskuläre und kardiale Antworten beeinflussen. Die PDE2A‑Aktivität ist über cAMP/CREB und verwandte Signalknoten an der Regulation mitochondrialer und inflammatorischer Stressantworten beteiligt. Eine dysregulierte Umsetzung zyklischer Nukleotide unter Beteiligung von PDE2A wurde mit neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Phänotypen sowie kardiometabolischer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was PDE2A als Ziel zur Analyse von Signalwegen in krankheitsrelevanten Modellen unterstützt.

PDE2A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PDE2A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PDE2A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PDE2A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PDE2A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PDE2A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PDE2A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PDE2A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PDE2A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PDE2A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.