Plásmido Doble Nickase (h) PBR: sc-401624-NIC

TSPO, también conocido como receptor benzodiazepínico periférico (PBR), es una proteína de 18 kDa de la membrana externa mitocondrial que participa en el transporte de colesterol, la esteroidogénesis y la regulación de la permeabilidad mitocondrial y la bioenergética. Está funcionalmente vinculado a las respuestas al estrés mitocondrial, la homeostasis de especies reactivas de oxígeno y la señalización apoptótica, y se utiliza ampliamente como marcador molecular de la activación microglial y la neuroinflamación. La expresión alterada de TSPO y su localización mitocondrial se han asociado con procesos inflamatorios y neurodegenerativos, así como con el metabolismo y la proliferación de células cancerosas. Como centro asociado a la mitocondria, TSPO ofrece un punto de entrada manejable para estudiar la comunicación cruzada entre el tráfico de lípidos, el estrés oxidativo y la señalización inmunitaria innata.

PBR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TSPO en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TSPO. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TSPO. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TSPO alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.