Plasmide Double Nickase (m) paxillin: sc-422546-NIC

Le gène murin **Pxn** code la **paxilline**, un adaptateur multidomaine des adhérences focales qui coordonne la signalisation dépendante des intégrines et le remodelage du cytosquelette d’actine lors de l’adhésion, de l’étalement et de la migration cellulaires. La paxilline sert d’échafaudage pour des kinases et des régulateurs de GTPases, intégrant les signaux issus de FAK/SRC et des voies en aval de la famille RHO afin de moduler le renouvellement des adhérences focales et la mécanotransduction. Par ces fonctions, elle influence la perception de la matrice extracellulaire, la dynamique des lamellipodes et la polarité cellulaire. Une signalisation de la paxilline et un remodelage des adhérences focales dérégulés sont fréquemment impliqués dans une motilité altérée et des phénotypes invasifs dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies, faisant de **Pxn** un nœud utile pour analyser les réseaux de signalisation associés à l’adhésion.

paxillin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pxn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pxn. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pxn. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pxn.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.