paxillin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416733

Übersicht

PXN kodiert Paxillin, ein Adapterprotein der Fokalkontakte, das Integrin-Signale mit dem Umbau des Aktin-Zytoskeletts koordiniert und so Zelladhäsion, Ausbreitung und Migration steuert. Paxillin dient als Gerüstprotein für Kinasen und Strukturproteine, darunter FAK und SRC, und verknüpft Signale aus der extrazellulären Matrix mit nachgeschalteten Signalwegen wie MAPK/ERK- und PI3K-Signaling. Durch die Regulation des Umsatzes von Fokalkontakten und der Mechanotransduktion trägt Paxillin zu Prozessen wie Wundheilung, dem Trafficking von Immunzellen und extrazellulärmatrixgetriebenen Zellantworten bei. Fehlregulierte Paxillin-Signalgebung und veränderte Fokalkontakt-Dynamiken werden häufig im Zusammenhang mit veränderter Zellbeweglichkeit sowie Invasionsphänotypen untersucht, die für die Krebsbiologie und fibrotische oder entzündliche Mikroumgebungen relevant sind.

Das paxillin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PXN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PXN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PXN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die paxillin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PXN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der paxillin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PXN-Exone abzielen, die für die paxillin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PXN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom paxillin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom paxillin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PXN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das paxillin HDR-Plasmid (h) und paxillin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PXN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PXN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.