Pax-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403899-ACT

PAX9 kodiert den Paired-Box-Transkriptionsfaktor Pax-9, einen nukleären, DNA-bindenden Regulator, der für die embryonale Musterbildung und Organogenese erforderlich ist, insbesondere für die kraniofaziale und dentale Entwicklung sowie die Entwicklung von Thymus und Nebenschilddrüsen. Pax-9 moduliert Programme der Linienfestlegung, indem es Transkriptionsnetzwerke mit anderen Entwicklungsregulatoren koordiniert und dadurch den Chromatinzustand sowie die nachgelagerte Expression von Differenzierungsgenen beeinflusst. Eine veränderte PAX9-Dosierung oder -Funktion wurde mit angeborenem Zahnagenesie und weiteren kraniofazialen Entwicklungsanomalien in Verbindung gebracht, was PAX9 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung von Morphogenese und Zellschicksalskontrolle macht. In adulten und Krankheitskontexten wird eine fehlregulierte PAX9-Expression als Marker und Modulator epithelialer Differenzierungszustände sowie transkriptioneller Umprogrammierung untersucht.

Pax-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PAX9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pax-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PAX9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PAX9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pax-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PAX9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pax-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pax-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PAX9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.