Pax-8 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401757-LAC

PAX8 codifica Pax-8, un fattore di trascrizione della famiglia “paired box” necessario per la specificazione di linea e la differenziazione nelle cellule follicolari della tiroide, nell’epitelio renale e nei tessuti derivati dai dotti di Müller. Pax-8 regola programmi genici che controllano l’identità epiteliale, l’organogenesi e la biosintesi ormonale, inclusi i network trascrizionali che governano i geni tiroidei specifici e le vie di segnalazione dello sviluppo. Un’alterata espressione di PAX8 o eventi di fusione sono associati alla tumorigenesi in ambito tiroideo e renale, mentre alterazioni germinali sono state collegate all’ipotiroidismo congenito e a difetti dello sviluppo urogenitale. Nei modelli cellulari, l’attività di PAX8 influenza gli stati della cromatina e i circuiti trascrizionali che plasmano proliferazione, differenziazione e output metabolici.

Le particelle di attivazione lentivirale Pax-8 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PAX8 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Pax-8 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PAX8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Pax-8. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PAX8 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.