Pax-8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401757

Panoramica

PAX8 codifica Pax-8, un fattore di trascrizione della famiglia “paired box” che regola la specificazione di linea e l’organogenesi, con ruoli di rilievo nello sviluppo dei follicoli tiroidei e nella differenziazione epiteliale nel rene e nel sistema mülleriano. Pax-8 si lega a motivi del DNA specifici di sequenza per coordinare programmi trascrizionali che controllano identità cellulare, proliferazione e sopravvivenza, e coopera con altri regolatori trascrizionali per modellare la cromatina e le reti di espressione genica. Nei tessuti adulti, PAX8 contribuisce al mantenimento degli stati differenziati e la sua espressione deregolata o i suoi riarrangiamenti sono stati associati ad alterazioni del controllo trascrizionale in diverse neoplasie epiteliali, rendendolo un marcatore utilizzato di frequente negli studi sull’origine dei tumori. Queste funzioni rendono PAX8 un nodo utile per indagare circuiti regolatori dello sviluppo, la plasticità epiteliale e firme di lineage-tracing in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAX8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAX8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAX8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pax-8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAX8 per lo studio della segnalazione di Pax-8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAX8 critici per la funzione di Pax-8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAX8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pax-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pax-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAX8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pax-8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pax-8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAX8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAX8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.