Pax-6 Lentiviral Activation Particles (m): sc-422119-LAC

Das Mausgen *Pax6* kodiert den Paired-Box-Transkriptionsfaktor Pax-6, einen Masterregulator der Entwicklung von Auge, Vorderhirn und endokrinem Pankreas, der die Festlegung von Zelllinien, die Aufrechterhaltung von Vorläuferzellen und die neuronale Differenzierung steuert. Pax-6 bindet an Promotor- und Enhancer-Elemente, um transkriptionelle Programme nachgeschaltet zu entwicklungsbiologischen Morphogensignalen zu koordinieren und während der Gewebemusterbildung chromatinabhängige Genregulation zu modulieren. Im adulten Kontext trägt Pax-6 zur neuronalen Plastizität und zur Expression endokriner Gene bei und verknüpft seine Dosierung mit Signalwegen, die Zellschicksalsübergänge und die Stabilität von Differenzierungszuständen regulieren. Eine fehlregulierte PAX6-Aktivität ist mit kongenitalen okulären Fehlbildungen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert und macht Pax-6 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung entwicklungsbiologischer Genregulationsnetzwerke und krankheitsrelevanter transkriptioneller Kontrolle.

Pax-6 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Pax6-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pax-6 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Pax6-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pax-6-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Pax6-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.