Pax-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422115

Übersicht

Das murine Gen *Pax2* kodiert Pax-2, einen Paired-Box-Transkriptionsfaktor, der während der Organogenese Genexpressionsprogramme reguliert, insbesondere in der sich entwickelnden Niere, im Sehnerv/der Retina und im Innenohr. Pax-2 wirkt an der Festlegung von Zelllinien und der epithelialen Differenzierung mit, indem es entwicklungsbiologische Transkriptionsnetzwerke koordiniert und mit Signalwegen wie WNT- und Notch-Signaling interagiert. Eine veränderte PAX2-Aktivität ist mit angeborenen Fehlbildungen der Nieren und Harnwege sowie mit Störungen der Augenentwicklung assoziiert, weshalb Pax2 in Entwicklungs- und Krankheitsmodellierungsstudien häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt verwendet wird. In Zellsystemen beeinflusst Pax-2 Proliferation, Morphogenese und die Aufrechterhaltung gewebespezifischer Identität durch direkte DNA-Bindung sowie Transkriptions-Repressions-/Aktivierungskomplexe.

Das Pax-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pax2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pax2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pax2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pax-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pax2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pax-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pax2-Exone abzielen, die für die Pax-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pax2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pax-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Pax-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pax2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pax-2 HDR-Plasmid (m) und Pax-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pax2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pax2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.