PARP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402224-ACT

O gene humano **PARP2** codifica a poli(ADP-ribose) polimerase-2 (PARP-2), uma enzima nuclear que detecta quebras nas fitas de DNA e catalisa a ADP-ribosilação de proteínas-alvo para coordenar o remodelamento da cromatina e o reparo do DNA. A PARP-2 atua na resposta a danos no DNA, particularmente no reparo por excisão de bases e no reparo associado à replicação, e coopera com PARP1 e XRCC1 para organizar a montagem de complexos de reparo. Por meio da regulação da estabilidade genômica, da integridade das forquilhas de replicação e da sinalização de checkpoints do ciclo celular, o PARP2 contribui para respostas celulares ao estresse que frequentemente se encontram alteradas na biologia tumoral e em defeitos de reparo do DNA associados à neurodegeneração. Assim, a modulação da expressão de PARP2 é útil para dissecar vias de estresse genotóxico, respostas transcricionais a danos no DNA e a sensibilidade dependente do contexto a perturbações nos mecanismos de reparo do DNA em modelos celulares humanos.

PARP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PARP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PARP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PARP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PARP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PARP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PARP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PARP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PARP-2 em células tumorais com expressão de PARP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.