Particules Lentivirales d'Activation (h) PARP-14: sc-402812-LAC

La PARP14 humaine (PARP-14) est une mono-ADP-ribosyltransférase de la famille des poly(ADP-ribose) polymérases, qui régule la fonction des protéines et des programmes transcriptionnels via l’ADP-ribosylation. Elle participe à la signalisation associée à la chromatine, à la régulation de gènes sensibles aux cytokines et aux voies d’adaptation au stress, en intégrant des signaux issus des réseaux d’immunité innée et d’inflammation. La PARP-14 a été reliée à la modulation des réponses stimulées par les interférons, à la transcription dépendante de STAT et à la reprogrammation métabolique, ce qui souligne son intérêt pour l’étude de la signalisation immunitaire et des transitions d’état cellulaire. Une activité et des profils d’expression de PARP14 dérégulés ont été associés à des phénotypes inflammatoires et à des dépendances transcriptionnelles liées au cancer, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration des voies dans des modèles pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales PARP-14 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PARP14 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PARP-14 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PARP14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PARP-14. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PARP14 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.