Plasmide CRISPR/Cas9 KO PARM-1 (h): sc-406775

Présentation

PARM1 code la protéine mucine‑like 1 régulée par les androgènes dans la prostate (PARM‑1), une protéine de type mucine associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la régulation de l’adaptation au stress cellulaire et de l’homéostasie de la voie sécrétoire. Les activités décrites relient PARM‑1 à la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et aux processus de contrôle qualité du RE, qui influencent la survie cellulaire, la sensibilité à l’apoptose et les programmes de différenciation. L’expression de PARM1 répond à des signaux hormonaux et dépend du contexte tissulaire, et a été étudiée en biologie épithéliale ainsi que dans des profils transcriptionnels associés aux tumeurs. Ces caractéristiques font de PARM1 un point d’entrée utile pour étudier comment les voies liées au RE façonnent la protéostasie, le contrôle de la croissance et des phénotypes pertinents pour les maladies dans des systèmes modèles humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PARM-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PARM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PARM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PARM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PARM-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PARM1 pour l'étude de la signalisation de PARM-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PARM1 essentiels à la fonction de PARM-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PARM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PARM-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PARM-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PARM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PARM-1 plasmide HDR (h) et le PARM-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PARM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PARM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.