Paraplegin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406299

Übersicht

SPG7 kodiert Paraplegin, eine ATP-abhängige Metalloprotease der inneren Mitochondrienmembran und Bestandteil des m-AAA-Proteasekomplexes, der die Proteinkontrolle (Quality Control), proteolytische Prozessierung sowie den Abbau fehlgefalteter Substrate der Membran und der Matrix unterstützt. Paraplegin trägt zur mitochondrialen Proteostase, zur Aufrechterhaltung der Atmungskette und zu homöostatischen Antworten auf oxidativen und proteotoxischen Stress bei, indem es die Proteinzusammensetzung der inneren Membran koordiniert überwacht. Eine Störung von SPG7 beeinträchtigt die mitochondriale Funktion und ist mit neurodegenerativen Phänotypen, einschließlich der hereditären spastischen Paraplegie, assoziiert, wodurch es ein nützliches Ziel zur Untersuchung axonaler Vulnerabilität und energieabhängiger neuronaler Aufrechterhaltung darstellt. SPG7-fokussierte Modelle liefern zudem Einblicke in Signalwege der mitochondrialen Dynamik, der Unfolded-Protein-Response und der stressadaptiven Signalübertragung.

Das Paraplegin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPG7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPG7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPG7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Paraplegin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPG7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Paraplegin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPG7-Exone abzielen, die für die Paraplegin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPG7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Paraplegin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Paraplegin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPG7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Paraplegin HDR-Plasmid (h) und Paraplegin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPG7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPG7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.