Plasmide Double Nickase (h) PAR-3: sc-417018-NIC

F2RL2 code le récepteur 3 activé par les protéases (PAR-3), un récepteur couplé aux protéines G sensible à la thrombine, qui module la signalisation plaquettaire et les réponses des cellules vasculaires via une activation protéolytique régulée. PAR-3 influence les voies hémostatiques et inflammatoires en façonnant des réseaux de signalisation GPCR en aval, notamment la mobilisation du calcium et des cascades de kinases qui recoupent l’activation cellulaire induite par la coagulation. Chez l’humain, une signalisation altérée de la famille des PAR a été associée à une thrombose dérégulée, à l’inflammation vasculaire et aux interactions tumeur–stroma, faisant de F2RL2 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation dépendante des protéases. L’étude de la fonction de PAR-3 permet d’examiner le dialogue croisé entre protéases, GPCR et signaux de la matrice extracellulaire dans des microenvironnements pertinents pour la maladie.

PAR-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F2RL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F2RL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F2RL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F2RL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.