PAPP-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406222

Panoramica

PAPPA codifica la pregnancy-associated plasma protein A (PAPP-A), una metalloproteinasi secreta della famiglia delle pappalisine che regola la biodisponibilità del fattore di crescita insulino-simile (IGF) scindendo le proteine leganti l’IGF, in particolare IGFBP4 e IGFBP5. Aumentando la quota locale di IGF libero, PAPP-A modula le vie di segnalazione guidate da IGF1R, come PI3K–AKT e MAPK/ERK, influenzando proliferazione, differenziamento e sopravvivenza cellulare in contesti di rimodellamento tissutale. L’attività di PAPP-A è inoltre collegata alla proteolisi in prossimità della matrice extracellulare e alla regolazione paracrina della segnalazione dei fattori di crescita nei microambienti vascolari e stromali. Un’espressione o un’attività deregolata di PAPPA è stata associata alla biologia placentare, alla biologia delle placche aterosclerotiche e a fenotipi cardiometabolici infiammatori, favorendo studi meccanicistici sul controllo dell’asse IGF in tipi cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAPP-A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAPPA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAPPA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAPPA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAPP-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAPPA per lo studio della segnalazione di PAPP-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAPPA critici per la funzione di PAPP-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAPPA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAPP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAPP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAPPA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAPP-A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAPP-A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAPPA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAPPA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.