PAP-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403906

Descripción general

PAPOLA codifica la poli(A) polimerasa alfa (PAP-α), un componente catalítico central de la maquinaria de procesamiento del extremo 3′ del ARNm que añade colas poli(A) a los pre-ARNm tras el corte en los sitios de poliadenilación. Al controlar la longitud de la cola poli(A) y acoplarse a los factores de especificidad de corte y poliadenilación, PAP-α influye en la estabilidad del ARNm, la exportación nuclear y la eficiencia de traducción, moldeando así programas globales de expresión génica. La poliadenilación alternativa dependiente de PAPOLA contribuye a la diversidad de isoformas de transcritos y puede remodelar la regulación postranscripcional durante la proliferación y la diferenciación. Los patrones desregulados de procesamiento del extremo 3′ y de poliadenilación están implicados en la biología del cáncer y en otros trastornos del control de la expresión génica, lo que convierte a PAP-α en un nodo útil para estudios mecanísticos del metabolismo del ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAP-α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PAPOLA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PAPOLA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PAPOLA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAP-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PAPOLA para la investigación de la señalización de PAP-α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PAPOLA críticos para la función de PAP-α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PAPOLA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAP-α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PAP-α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PAPOLA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAP-α (h) y el plásmido HDR PAP-α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PAPOLA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PAPOLA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.