Plásmido Doble Nickase (h) PAK4: sc-401895-NIC

PAK4 codifica la quinasa 4 activada por p21 (p21-activated kinase 4), una quinasa de serina/treonina que actúa aguas abajo de GTPasas de la familia Rho, como Cdc42, para coordinar la remodelación del citoesqueleto, la polaridad celular y la migración direccional. La señalización de PAK4 se integra con vías que controlan el recambio de adhesiones focales, la dinámica de la actina y señales de supervivencia, influyendo en procesos como el crecimiento dependiente de la adhesión y el comportamiento invasivo. Mediante la fosforilación de sustratos citosqueléticos y reguladores, PAK4 contribuye a la regulación de la resistencia a la apoptosis y la progresión del ciclo celular. La expresión o actividad desregulada de PAK4 se ha asociado con contextos de señalización oncogénica y fenotipos metastásicos, lo que la convierte en un blanco frecuente en estudios sobre la motilidad de células tumorales y los mecanismos de supervivencia.

PAK4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PAK4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PAK4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PAK4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PAK4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.