Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PABP Double Nickase Plasmid (h): sc-400688-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PABP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PABP Double-Nickase-Plasmid (h) und PABP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PABPC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PABP: sc-32318
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PABP Double Nickase Plasmid (h) | sc-400688-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PABP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400688-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **PABPC1** kodiert das Poly(A)-Bindungsprotein (PABP), einen zentralen RNA-bindenden Faktor, der die Poly(A)-Schwänze von mRNAs umhüllt und die Initiation der Translation, die Stabilisierung von mRNA sowie den deadenylierungsabhängigen Abbau koordiniert. Über Interaktionen mit eIF4G und weiteren Komponenten der Translationsmaschinerie fördert PABP die Zirkularisierung von mRNA und reguliert die Proteinsyntheseraten; zugleich beeinflusst es miRNA-vermittelte Silenzierung und die Dynamik von Stressgranula. Die PABP-abhängige Kontrolle des Transkript-Schicksals verknüpft PABPC1 mit Signalwegen, die Zellwachstum, Stressantworten und RNA-Qualitätskontrolle steuern. Eine Fehlregulation des RNA-Stoffwechsels und der Translationskontrolle macht PABPC1-assoziierte Prozesse in der Krebsbiologie und bei neurodegenerationsrelevanten Phänotypen bedeutsam, bei denen veränderte mRNA-Stabilität und Proteostase häufige Merkmale sind.
PABP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PABPC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PABPC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PABPC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PABPC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.