p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400444

Übersicht

CDKN1C kodiert p57^Kip2, einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor aus der CIP/KIP-Familie, der die CDK-Aktivität hemmt, um einen G1‑Zellzyklusarrest durchzusetzen und die terminale Differenzierung zu unterstützen. p57^Kip2 integriert Entwicklungs- und Wachstumssignale über die Regulation von Cyclin‑CDK‑Komplexen und ist mit Checkpoints verknüpft, die Proliferation mit der Festlegung von Zelllinien koordinieren. Das Gen ist geprägte (imprinted) und dosissensitiv, weshalb seine Expression während der Embryogenese, in der Plazentabiologie und in der Gewebehomöostase streng reguliert ist. Eine Fehlregulation von CDKN1C ist mit prägungsbedingten Wachstumsstörungen assoziiert und wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen eine veränderte Zellzykluskontrolle und Differenzierung zu krankheitsrelevanten Phänotypen beitragen.

Das p57 Kip2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDKN1C-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDKN1C-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDKN1C nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p57 Kip2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDKN1C-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p57 Kip2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDKN1C-Exone abzielen, die für die p57 Kip2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDKN1C-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p57 Kip2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom p57 Kip2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDKN1C-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p57 Kip2 HDR-Plasmid (h) und p57 Kip2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDKN1C-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDKN1C-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.