p38 gamma MAPK12 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424361-ACT

Mapk12 kodiert p38 gamma (MAPK12), eine stressaktivierte mitogenaktivierte Proteinkinase, die extrazelluläre Signale integriert, um Transkriptionsprogramme zu regulieren, welche die zelluläre Differenzierung, den Stoffwechsel und das Überleben steuern. p38 gamma ist Teil von MAPK-Signalnetzwerken nachgeschaltet zu entzündlichen Zytokinen und Umweltstress und beeinflusst Phosphorylierungskaskaden, die Genexpression und Zytoskelettdynamik prägen. In Mausmodellen wurde die MAPK12-Aktivität mit gewebespezifischen Reaktionen in der Skelettmuskulatur sowie mit immunrelevanter Signalübertragung in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung von Stressadaptation und kontextabhängigem Kinase-Crosstalk nützlich macht. Eine fehlregulierte Signalübertragung im p38-Signalweg wird häufig in Modellen für Entzündung, metabolische Dysbalance und krebsassoziierte Umprogrammierung von Signalwegen untersucht; dabei kann MAPK12 als Knotenpunkt wirken, der die Signalstärke und Spezifität des Signalwegs moduliert.

p38 gamma MAPK12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mapk12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

p38 gamma MAPK12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mapk12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mapk12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen p38 gamma MAPK12-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mapk12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von p38 gamma MAPK12-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des p38 gamma MAPK12-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mapk12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.