p38 gamma MAPK12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400427-ACT

MAPK12 codifica a p38γ, uma proteína quinase ativada por estresse da família das MAPKs (mitogen-activated protein kinases) que integra sinais extracelulares em programas dependentes de fosforilação que controlam a transcrição, a dinâmica do citoesqueleto e a adaptação metabólica. Como parte da rede de sinalização p38 MAPK, a p38γ participa de respostas a citocinas inflamatórias e ao estresse ambiental, modulando a regulação a jusante da expressão gênica e da degradação/renovação de proteínas. A atividade de MAPK12 tem sido implicada na diferenciação celular e em sinalização específica de tecidos, com associações relatadas a contextos de sinalização oncogênica e a fenótipos inflamatórios nos quais é comum o redirecionamento das vias de MAPK. Esses atributos tornam a p38γ (MAPK12) um ponto útil para dissecar o crosstalk da sinalização de estresse com MAPK/ERK, programas associados ao NF-κB e outros circuitos regulatórios conduzidos por quinases.

p38 gamma MAPK12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPK12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p38 gamma MAPK12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPK12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPK12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p38 gamma MAPK12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPK12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p38 gamma MAPK12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p38 gamma MAPK12 em células tumorais com expressão de MAPK12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.