Plásmido CRISPR de Activación (m) p38 alpha MAPK14: sc-424051-ACT

Mapk14 codifica p38 alfa (MAPK14), una quinasa de serina/treonina activada por estrés que integra citocinas inflamatorias, señales de receptores tipo Toll y estrés ambiental en cascadas de fosforilación que controlan la transcripción, la estabilidad del ARNm y la traducción proteica. En células de ratón, p38 alfa regula ATF2, ELK1 y módulos de quinasas posteriores como MAPKAPK2/3, modelando la producción de mediadores como TNF e IL-6 e influyendo en los puntos de control del ciclo celular y la apoptosis. Esta vía interactúa con la señalización de NF-κB y del interferón, vinculando la actividad de MAPK14 con las respuestas inmunitarias innatas y la homeostasis tisular. La señalización de p38 desregulada se utiliza ampliamente como un nodo mecanístico en modelos de enfermedad inflamatoria, estrés metabólico, neuroinflamación y señalización del microambiente asociada al cáncer.

p38 alpha MAPK14 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mapk14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p38 alpha MAPK14 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mapk14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mapk14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p38 alpha MAPK14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mapk14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p38 alpha MAPK14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p38 alpha MAPK14 en células tumorales con expresión de Mapk14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.