p22-phox CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400325

Übersicht

CYBA kodiert p22-phox, eine essenzielle membranständige Untereinheit des NADPH-Oxidase-Komplexes (NOX2) in Phagozyten, die gp91-phox/NOX2 stabilisiert und den Zusammenbau der aktiven Oxidase an Phagosomen- und Plasmamembranen unterstützt. Indem p22-phox den Elektronentransfer auf molekularen Sauerstoff ermöglicht, ist es für die regulierte Bildung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) erforderlich, die zur antimikrobiellen Abwehr und zur redoxabhängigen Signalübertragung in Zellen der angeborenen Immunität beiträgt. CYBA-abhängige ROS beeinflussen Signalwege, die mit Phagozytose, der Produktion inflammatorischer Mediatoren und der Dynamik des oxidativen Bursts verknüpft sind. Genetische Störungen oder eine veränderte Expression von CYBA sind mit einer beeinträchtigten NOX-Aktivität assoziiert und werden im Kontext chronisch-granulomatöse-Erkrankung-ähnlicher Phänotypen, inflammatorischer Dysregulation und zellulärer Antworten auf oxidativen Stress untersucht.

Das p22-phox CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYBA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYBA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYBA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p22-phox-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYBA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p22-phox-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYBA-Exone abzielen, die für die p22-phox-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYBA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p22-phox CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom p22-phox CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYBA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p22-phox HDR-Plasmid (h) und p22-phox HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYBA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYBA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.