OX2R Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425439-ACT

Il gene murino **Cd200r1** codifica **OX2R** (recettore CD200 1), un recettore immunoregolatorio inibitorio espresso prevalentemente da cellule della linea mieloide, tra cui macrofagi, cellule dendritiche e microglia. Il legame di OX2R con il suo ligando CD200 promuove una segnalazione dipendente da ITIM che recluta fosfatasi come SHP-1/2 per attenuare le cascate pro-infiammatorie, limitando così la produzione di citochine, l’attivazione dei fagociti e le funzioni di presentazione dell’antigene. Attraverso queste vie, Cd200r1 contribuisce al mantenimento della tolleranza immunitaria e dell’omeostasi tissutale nei siti barriera e nel sistema nervoso centrale. La disregolazione della segnalazione CD200–OX2R è stata implicata in modelli di neuroinfiammazione, autoimmunità, immunopatologia associata a infezioni ed evasione immunitaria tumorale, rendendolo un nodo utile per analizzare la biologia dei checkpoint mieloidi.

OX2R Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd200r1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OX2R Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd200r1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd200r1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OX2R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd200r1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OX2R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OX2R nelle cellule tumorali con espressione di Cd200r1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.