Osteoglycin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403018-ACT

OGN kodiert Osteoglycin, ein kleines leucinreiches Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das an Kollagenfibrillen bindet und den Matrixaufbau, die Gewebezugfestigkeit sowie die Zell–Matrix-Signalübertragung moduliert. Osteoglycin beeinflusst die Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren und die Rezeptorsignalgebung in stromalen Kompartimenten und verknüpft damit den Umbau der extrazellulären Matrix mit zellulären Programmen wie Adhäsion, Migration und Differenzierung. Eine veränderte OGN-Expression wurde mit fibrotischem Remodeling und einer dysregulierten Erneuerung der extrazellulären Matrix in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten wie kardiovaskulärem Remodeling, Tumorstroma-Biologie und Wundheilung untersucht. Diese Funktionen machen OGN zu einem nützlichen Ziel, um zu untersuchen, wie Zusammensetzung und Organisation der Matrix die Gewebehomöostase und krankheitsassoziierte Mikroumgebungen prägen.

Osteoglycin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OGN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Osteoglycin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OGN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OGN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Osteoglycin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OGN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Osteoglycin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Osteoglycin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OGN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.