OCTN1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403258-ACT

SLC22A4 kodiert den humanen organischen Kationen-/Carnitin-Transporter OCTN1, einen polyspezifischen Solute Carrier, der die zelluläre Aufnahme und den Efflux kleiner kationischer Metabolite über die Plasmamembran reguliert. OCTN1 trägt zur Nährstoffverarbeitung und zur Redoxhomöostase bei, indem es Substrate wie Ergothionein und verwandte organische Kationen transportiert und dadurch die intrazelluläre antioxidative Kapazität sowie die metabolische Anpassung beeinflusst. Über diese Transportaktivitäten ist SLC22A4 in Membrantransportnetzwerke eingebunden, die die Funktion epithelialer Barrieren, die Physiologie von Immunzellen und die Disposition von Xenobiotika prägen. Genetische Variationen und eine veränderte Expression von SLC22A4 wurden in der Literatur mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen sowie mit Veränderungen zellulärer Stressantworten in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zur Immunmetabolik und Epithelbiologie unterstreicht.

OCTN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC22A4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OCTN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC22A4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC22A4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OCTN1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC22A4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OCTN1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OCTN1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC22A4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.