OAS1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402414-ACT

Humanes OAS1 (2′-5′-Oligoadenylat-Synthetase 1) ist ein durch Interferon stimuliertes Enzym, das virale doppelsträngige RNA erkennt und die Synthese von 2′-5′-verknüpften Oligoadenylaten katalysiert. Diese Second Messenger aktivieren RNase L, fördern den Abbau viraler und zellulärer RNA und prägen die angeborene Immun-Signalgebung, einschließlich Rückkopplung in Typ-I-Interferon-Signalwege. Die OAS1-Aktivität beeinflusst antivirale Restriktion, den Entzündungstonus und Stressantworten; genetische oder expressionsbedingte Variationen wurden mit unterschiedlicher Anfälligkeit und unterschiedlichen Verläufen in Kontexten viraler Infektionen sowie mit interferongetriebenen Immunphänotypen in Verbindung gebracht. Als zentraler Knotenpunkt der RNA-sensitiven Immunität wird OAS1 aufgrund seiner Auswirkungen auf Wirt–Erreger-Interaktionen und zytokinregulierte Transkriptionsprogramme breit untersucht.

OAS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OAS1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OAS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OAS1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OAS1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OAS1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OAS1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OAS1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OAS1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OAS1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.