NUMB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401673-ACT

ヒトNUMBは、Notchシグナル伝達に拮抗しつつ膜受容体のユビキチン依存的なトラフィッキングを協調的に制御することで、細胞運命決定を調節するエンドサイトーシスアダプタータンパク質をコードします。NUMBは、AP2/EPS15ファミリーの構成要素との相互作用を介して、クラスリン介在性エンドサイトーシスおよび細胞極性プログラムに関与し、非対称細胞分裂、分化、ならびに前駆細胞の維持に影響を与えます。受容体のターンオーバーと下流の転写出力を調節することにより、NUMBは発生シグナルを細胞骨格の編成や小胞動態と統合します。NUMBの発現量または局在の破綻は、複数の疾患関連の細胞状況においてNotch経路活性の異常や、増殖と分化の状態バランスの変化と関連づけられています。

NUMB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NUMBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NUMB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NUMB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNUMB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NUMBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNUMB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNUMB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNUMB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNUMB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。