NT-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401458-ACT

Neurotrophin 3 (NTF3) kodiert das sezernierte Neurotrophin NT-3, einen zentralen Regulator des neuronalen Überlebens, des Neuritenauswuchses und der synaptischen Reifung während der Entwicklung sowie bei der Aufrechterhaltung adulten Gewebes. NT-3 signalisiert hauptsächlich über NTRK3/TrkC und aktiviert dabei die MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und PLCγ-Signalwege, wodurch trophische Unterstützung mit aktivitätsabhängiger Plastizität und Differenzierungsprogrammen verknüpft wird. Über das Nervensystem hinaus beeinflusst NTF3-abhängiges Signaling die Axonführung, die Funktion sensorischer Neuronen und neuroimmunologische Interaktionen, unter anderem durch die Modulation der Genexpression und der Zytoskelettdynamik. Eine fehlregulierte Neurotrophin-Signalübertragung, einschließlich veränderter Aktivität der NT-3/TrkC-Achse, wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration und die Biologie neuropathischer Schmerzen relevant sind.

NT-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NTF3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NT-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NTF3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NTF3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NT-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NTF3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NT-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NT-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NTF3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.