NQO1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400326-LAC

NQO1 (NAD(P)H-Quinon-Dehydrogenase 1) ist ein zytosolisches Flavoprotein, das die Zwei-Elektronen-Reduktion von Chinonen zu Hydrochinonen katalysiert und dadurch Redox-Cycling sowie die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies begrenzt. Als klassisches, durch NRF2/KEAP1 reguliertes Entgiftungsenzym unterstützt NQO1 die zelluläre Redox-Homöostase und steht in Verbindung mit Xenobiotika-Metabolismus, oxidativen Stressantworten und der Proteostase, u. a. durch die Stabilisierung ausgewählter Proteine. Veränderte NQO1-Expression und -Aktivität wurden mit Unterschieden in der Anfälligkeit für oxidative Schäden sowie mit kontextabhängiger Tumorbiologie in Verbindung gebracht, was NQO1 für mechanistische Studien zur Karzinogenese und Stressadaptation relevant macht. NQO1 wird außerdem häufig als Readout für die Aktivierung von Signalwegen in der Antioxidant-Response-Element-(ARE)-Signalgebung und in elektrophil-induzierten Transkriptionsprogrammen verwendet.

NQO1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NQO1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NQO1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NQO1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NQO1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NQO1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.