Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NOXA Double Nickase Plasmid (h): sc-400498-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NOXA Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NOXA Double-Nickase-Plasmid (h) und NOXA Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PMAIP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NOXA: sc-515840
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NOXA Double Nickase Plasmid (h) | sc-400498-NIC | 20 µg | $410.00 |
PMAIP1 kodiert das BH3-only-Protein NOXA, einen p53-responsiven, proapoptotischen Regulator, der die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran fördert, indem er antiapoptotische Mitglieder der BCL2-Familie neutralisiert – mit ausgeprägter Selektivität für MCL1 und BCL2A1. NOXA integriert Signale von DNA-Schäden und onkogenem Stress, um den intrinsischen Apoptoseweg zu aktivieren, und beeinflusst dadurch die Caspase-Aktivierung, die zelluläre Fitness und stressinduzierte Entscheidungen über das Zellschicksal. Seine Expression und sein Abbau werden zudem durch ubiquitinvermittelte Proteostase sowie durch Transkriptionsprogramme geprägt, die downstream von p53 und verwandten Stresssignalwegen liegen. Eine Dysregulation der PMAIP1–NOXA-Achse wird häufig im Zusammenhang mit veränderter Apoptoseempfindlichkeit untersucht, unter anderem in der Krebsbiologie und bei Mechanismen der Resistenz gegen mitochondriale Apoptose.
NOXA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PMAIP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PMAIP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PMAIP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PMAIP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.