Plasmide Double Nickase (h) Nox5: sc-401223-NIC

NOX5 code pour Nox5, une NADPH oxydase activée par le calcium qui génère des espèces réactives de l’oxygène (ROS) en tant qu’intermédiaires de signalisation dans les cellules humaines. En couplant la dynamique intracellulaire du Ca2+ à une production régulée de superoxyde et de peroxyde d’hydrogène, Nox5 influence des voies sensibles à l’état redox, notamment MAPK et NF-κB, ainsi que la modulation des canaux ioniques et le remodelage du cytosquelette. Les ROS dérivées de Nox5 contribuent au contrôle de la prolifération, de la migration et des réponses inflammatoires, et leur dérégulation est impliquée dans des phénotypes associés au stress oxydant, pertinents pour la biologie cardiovasculaire et métabolique. Son activité est souvent étudiée dans le contexte de la signalisation endothéliale et des cellules musculaires lisses, de la régulation immunitaire et des programmes transcriptionnels dépendants du redox.

Nox5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NOX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NOX5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NOX5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NOX5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.