Plásmido Doble Nickase (h) Notch 3: sc-400424-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Notch 3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Notch 3 (h) y el plásmido de doble nickasa Notch 3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NOTCH3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Notch 3 Anticuerpo (A-6): sc-515825
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Notch 3 | sc-400424-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Notch 3 | sc-400424-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NOTCH3 codifica Notch 3, un receptor transmembrana de paso único que media la señalización yuxtacrina mediante proteólisis inducida por ligando y la translocación nuclear del dominio intracelular de Notch. En el núcleo, Notch 3 coopera con CSL/RBPJ y coactivadores para regular programas transcripcionales que controlan decisiones de destino celular, diferenciación y homeostasis tisular. La actividad de NOTCH3 se entrecruza con vías que gobiernan la biología del músculo liso vascular, la integridad neurovascular y el patrón de desarrollo, y se estudia con frecuencia en contextos de señalización Notch desregulada. La alteración de la señalización de NOTCH3 se asocia con trastornos vasculares y neurovasculares y se ha investigado en la proliferación de células tumorales, estados tipo célula madre e interacciones con el microambiente.
Notch 3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NOTCH3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NOTCH3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NOTCH3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NOTCH3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.