Nir3 Double Nickase Plasmid (m): sc-422631-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nir3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nir3 Double-Nickase-Plasmid (m) und Nir3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pitpnm2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nir3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422631-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nir3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422631-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pitpnm2 kodiert Nir3, ein Phosphatidylinositol-Transferprotein, das dazu beiträgt, die Verfügbarkeit von Phosphoinositiden an Kontaktstellen zwischen endoplasmatischem Retikulum und Plasmamembran zu regulieren. Nir3 ist am Phosphoinositid-Umsatz beteiligt, indem es nach einer Phospholipase‑C-Signalgebung die Wiederauffüllung von PI(4,5)P2 unterstützt und dadurch Ca2+-gekoppelte Rezeptorantworten, den Membrantransport und die Zytoskelettdynamik beeinflusst. Über diese Funktionen trägt Nir3 zur Homöostase der Lipidsignalgebung bei, was für die neuronale Physiologie und allgemeinere Prozesse der rezeptorvermittelten Signalübertragung und des Membranumbaus relevant ist. Eine veränderte Kontrolle des Phosphoinositidstoffwechsels ist in zahlreichen Kontexten zellulären Stresses und zellulärer Dysfunktion implicated, was mechanistische Studien zum Nir3-abhängigen Lipidtransfer und zur Anpassung der Signalübertragung motiviert.
Nir3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pitpnm2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pitpnm2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pitpnm2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pitpnm2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.