Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nir2 Double Nickase Plasmid (m): sc-422251-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nir2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nir2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Nir2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pitpnm1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nir2: sc-136140
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nir2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422251-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nir2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422251-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pitpnm1 kodiert für Nir2, ein Phosphatidylinositol-Transferprotein, das die Homöostase von Phosphoinositiden unterstützt, indem es Lipide zwischen Membranen austauscht und die Pools von Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat an der Plasmamembran aufrechterhält. In Mauszellen verknüpft Nir2 die rezeptorvermittelte Phospholipase‑C-Signalgebung mit der Lipidnachlieferung an Kontaktstellen zwischen endoplasmatischem Retikulum und Plasmamembran und beeinflusst dadurch calciumabhängige Signalprozesse, Membrantransport und die Dynamik des Zytoskeletts. Über seine Rolle bei der Regulation des Phosphoinositid-Umsatzes trägt Nir2 zu Prozessen wie Zellmigration, Neuritenauswuchs und Vesikeltransport bei, die empfindlich auf Flüsse der Lipid-Signalgebung reagieren. Eine Fehlregulation des Phosphoinositidstoffwechsels und der Funktion von Membrankontaktstellen ist für Untersuchungen in Neurobiologie, Stoffwechsel und proliferativer Signalgebung breit relevant und eröffnet mechanistische Ansatzpunkte für krankheitsorientierte Forschungsmodelle.
Nir2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pitpnm1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pitpnm1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pitpnm1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pitpnm1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.