Ninjurin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408142-ACT

NINJ2 kodiert Ninjurin-2, ein Zelloberflächen-Adhäsionsprotein, das an kontaktabhängiger Signalübertragung, Membrandynamik und der Modulation der Zellmigration beteiligt ist. Mitglieder der Ninjurin-Familie werden mit Reaktionen auf Gewebeschädigungen und entzündliche Signale in Verbindung gebracht und unterstützen Funktionen wie Leukozyten-Trafficking, Neuritenauswachsen sowie glia–neuronale Interaktionen. In humangenetischen und funktionellen Studien wurde NINJ2 mit neurovaskulären und neuroinflammatorischen Phänotypen assoziiert, was die Untersuchung motiviert, wie eine veränderte NINJ2-Expression zelluläre Stressantworten und interzelluläre Kommunikation beeinflusst. Diese Eigenschaften machen Ninjurin-2 relevant für Signalwege, die Adhäsion, Immun-Signalisierung und die Homöostase des Nervensystems steuern.

Ninjurin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NINJ2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ninjurin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NINJ2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NINJ2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ninjurin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NINJ2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ninjurin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ninjurin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NINJ2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.