Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG: sc-403321-ACT

CHRNG code la sous-unité gamma du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR), un canal ionique ligand-dépendant qui assure, dans le muscle squelettique en développement, un flux de cations dépendant de l’acétylcholine et la dépolarisation membranaire. Le récepteur contenant la sous-unité gamma est une caractéristique du muscle fœtal ou dénervé et est remplacé par la sous-unité epsilon dans les jonctions neuromusculaires matures, ce qui relie CHRNG à la synaptogenèse développementale et au changement de sous-unités du récepteur. En participant à la signalisation cholinergique et à des programmes de différenciation musculaire dépendants de l’activité, CHRNG influence la transmission neuromusculaire et l’excitabilité. Des variations pathogènes de CHRNG ont été associées à des phénotypes myasthéniques congénitaux et à des syndromes liés à l’akinésie fœtale, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude du développement neuromusculaire et des mécanismes de maladie.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRNG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRNG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRNG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRNG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRNG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.