Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404780-ACT

CHRNE kodiert die Epsilon‑Untereinheit des muskeltypischen nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR), eines ligandengesteuerten Ionenkanals, der sich in der postsynaptischen Membran der neuromuskulären Endplatte zusammenlagert und eine schnelle synaptische Signalübertragung vermittelt. Nach Bindung von Acetylcholin öffnet sich der Rezeptor und ermöglicht den Einstrom von Kationen, wodurch Neurotransmittersignale mit Membrandepolarisation sowie den Erregungs‑Kontraktions‑Prozessen gekoppelt werden. Die CHRNE-Expression ist entwicklungsabhängig reguliert und trägt in reifer Skelettmuskulatur zur Rezeptorzusammensetzung, Lokalisation und Kanalkinetik bei. Genetische Veränderungen von CHRNE und anderen nAChR‑Komponenten sind mit kongenitalen myasthenischen Syndromen assoziiert, was CHRNE zu einem wichtigen Genlokus für die Untersuchung neuromuskulärer Signalübertragung, Synapsenerhalt und Rezeptorassemblierungswege macht.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNE-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNE-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNE-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNE-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNE-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.