Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418955

Panoramica

Chrna6 codifica la subunità α6 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), canali cationici attivati da ligando che modulano l’eccitabilità di membrana e il rilascio di neurotrasmettitori in risposta all’acetilcolina e alla nicotina. Gli nAChR contenenti α6 sono arricchiti nei circuiti dopaminergici e in altri circuiti catecolaminergici, dove regolano l’ingresso di calcio e plasmano la segnalazione sinaptica e la plasticità. Attraverso le vie della neurotrasmissione colinergica, CHRNA6 contribuisce all’attività di rete legata alla ricompensa e alla neuromodulazione guidata dagli stimoli. La variazione genetica e funzionale in CHRNA6 è stata associata a risposte alterate alla nicotina e a fenotipi neurocomportamentali, a supporto della sua rilevanza per la biologia della dipendenza e per modelli di disfunzione dei circuiti dopaminergici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chrna6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chrna6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chrna6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chrna6 per lo studio della segnalazione di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Chrna6 critici per la funzione di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chrna6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chrna6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chrna6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chrna6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.