Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401605-ACT

CHRNA4 kodiert die α4‑Untereinheit neuronaler nikotinischer Acetylcholinrezeptoren (nAChRs), die sich als liganden-gesteuerte Kationenkanäle zusammensetzen und eine schnelle synaptische Signalübertragung im zentralen Nervensystem vermitteln. α4‑haltige Rezeptoren, die häufig α4β2‑Komplexe bilden, regulieren Membrandepolarisation sowie calciumabhängige Signalwege, die die Neurotransmitterfreisetzung, die neuronale Erregbarkeit und die synaptische Plastizität beeinflussen. Über cholinerge Signalübertragung trägt CHRNA4 zu Signalwegen bei, die Aufmerksamkeit, Wachheit, Lernen und belohnungsbezogene Schaltkreise steuern; eine veränderte Rezeptorfunktion wurde mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter eine erhöhte Epilepsieanfälligkeit und Nikotinabhängigkeit. Die Modulation der CHRNA4‑Expression ist daher relevant, um Rezeptorstöchiometrie, Kanalbiophysik und aktivitätsabhängige Transkriptionsprogramme in humanen neuronalen Modellen zu untersuchen.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNA4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNA4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNA4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNA4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNA4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.