NG2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431202-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NG2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NG2 Double Nickase Plasmid (m) e il NG2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cspg4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NG2 Antibody (LHM 2): sc-53389
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NG2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431202-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NG2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431202-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Cspg4** codifica **NG2** (noto anche come **CSPG4**), un proteoglicano transmembrana a solfato di condroitina arricchito nelle cellule progenitrici degli oligodendrociti e nei periciti, dove regola adesione, migrazione e proliferazione cellulare. NG2 interagisce con componenti della matrice extracellulare e con la segnalazione associata alle integrine per modulare la dinamica del citoscheletro e la responsività ai fattori di crescita, sostenendo la stabilizzazione vascolare e lo sviluppo della sostanza bianca. La deregolazione dell’espressione di NG2/Cspg4 è spesso analizzata nel contesto della biologia dei gliomi, delle risposte a lesioni demielinizzanti e del rimodellamento dello stroma associato ai tumori, dove può influenzare lo stato cellulare e le interazioni con il microambiente tissutale. Come marcatore di linea e funzionale, NG2 è ampiamente utilizzato per studiare il mantenimento dei progenitori, le traiettorie di differenziamento e l’organizzazione dell’unità neurovascolare in modelli murini.
NG2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cspg4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cspg4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cspg4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cspg4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.