NFATc1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421863-LAC

Nfatc1 kodiert NFATc1, einen calciumregulierten Transkriptionsfaktor, der nach Ca²⁺-Einstrom nachgeschaltet von Calcineurin aktiviert wird. NFATc1 koordiniert Genexpressionsprogramme, die an der Aktivierung und Differenzierung von Immunzellen beteiligt sind, integriert Signale aus T‑Zell‑Rezeptor- und Zytokin-Signalwegen und wirkt mit AP‑1 zusammen, um die transkriptionellen Outputs zu steuern. In Mausmodellen ist NFATc1 zudem ein zentraler Regulator der Osteoklastogenese und des Knochenumbaus über RANKL‑getriebene Signalübertragung und verknüpft diesen Faktor damit mit entzündlichen Prozessen und Skelettphänotypen. Eine fehlregulierte NFATc1‑Aktivität wurde mit aberranten Immunantworten und pathologischem Gewebeumbau in Verbindung gebracht, was NFATc1 zu einem wertvollen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Kopplung von Signalübertragung und Transkription macht.

NFATc1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Nfatc1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NFATc1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Nfatc1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NFATc1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Nfatc1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.