Plasmide CRISPR d'Activation (h) NFκB p50: sc-400087-ACT

NFKB1 code la sous-unité p50 de NFκB, un composant central de la famille des facteurs de transcription NF-κB, qui se lie à l’ADN et régule des programmes d’expression génique inductibles impliqués dans l’immunité et les réponses au stress. p50 forme le plus souvent des hétérodimères avec RELA (p65) ou des homodimères, qui modulent les sorties transcriptionnelles contrôlant des cytokines, des chimiokines, des molécules d’adhérence et des facteurs anti-apoptotiques. L’activité de NFκB p50 s’intègre en aval des voies de signalisation du récepteur du TNF, de l’IL-1/TLR, du récepteur de l’antigène et des dommages à l’ADN, via une maturation dépendante d’IKK de p105 en p50 et une translocation nucléaire. Une dérégulation de la signalisation NFκB1 est impliquée dans l’inflammation chronique, la dysrégulation immunitaire, des programmes transcriptionnels oncogéniques et des réponses altérées à l’infection et au stress cellulaire, ce qui en fait une cible fréquente dans les études de voies et de réseaux géniques.

NFκB p50 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NFKB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NFκB p50 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NFKB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NFKB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NFκB p50. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NFKB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NFκB p50 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NFκB p50 dans les cellules tumorales présentant une expression de NFKB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.