NF-1X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421875

Übersicht

Nfix kodiert den nukleären Faktor I, X‑Typ (NF‑1X), einen sequenzspezifischen, DNA-bindenden Transkriptionsfaktor, der NFI‑Konsensus-Elemente erkennt und während der Entwicklung die Aktivität von Promotoren und Enhancern reguliert. In der Maus trägt NF‑1X zur Festlegung von Zelllinien sowie zu Reifungsprogrammen im Nervensystem und in der Skelettmuskulatur bei, indem es den Austritt aus dem Zellzyklus, die Differenzierung und die Expression extrazellulärmatrixassoziierter Gene beeinflusst. Faktoren der NF‑1‑Familie sind in Netzwerke des Chromatin-Remodelings und transkriptioneller Koregulatoren eingebunden, um Entwicklungszeitpunkte und Gewebearchitektur zu koordinieren. Eine Fehlregulation der NFIX‑Funktion wurde mit Entwicklungssyndromen sowie veränderten Wachstums- und Differenzierungsphänotypen in Verbindung gebracht, was Nfix zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise macht, die für Neuroentwicklung und Myogenese relevant sind.

Das NF-1X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nfix-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nfix-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nfix nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NF-1X-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nfix-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NF-1X-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nfix-Exone abzielen, die für die NF-1X-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nfix-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NF-1X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NF-1X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nfix-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NF-1X HDR-Plasmid (m) und NF-1X HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nfix-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nfix-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.