Neurotensin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401958-ACT

Neurotensin (NTS) kodiert ein sezerniertes Neuropeptid, das über Neurotensinrezeptoren signalisiert und dadurch Neurotransmission, neuroendokrine Sekretion, gastrointestinale Motilität sowie nozizeptive Verarbeitung moduliert. In menschlichen Geweben beeinflusst die neurotensinvermittelte GPCR-Signalgebung Second-Messenger-Kaskaden einschließlich PLC/PKC, MAPK/ERK und PI3K/AKT und verknüpft damit die Peptidfreisetzung mit Veränderungen der zellulären Erregbarkeit und transkriptionellen Programmen. Die NTS-Expression wird durch neuronale Aktivität und metabolische Signale reguliert, und veränderte Neurotensin-Signalgebung wurde in mehreren Modellsystemen mit dysregulierten dopaminergen Signalwegen, entzündungsassoziierter Signalgebung und tumorassoziierten Zellzuständen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen NTS zu einem nützlichen Knotenpunkt, um peptidvermittelte Kommunikation, Rezeptordesensibilisierung und die Umverdrahtung nachgeschalteter Signalwege in krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen.

Neurotensin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NTS-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neurotensin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NTS-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NTS-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neurotensin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NTS-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neurotensin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neurotensin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NTS-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.