neuroglobin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425686-ACT

Il gene **Ngb** del topo codifica la **neuroglobina**, una globina legante l’eme arricchita nei neuroni, dove supporta la gestione dell’ossigeno, l’omeostasi redox e la resilienza cellulare allo stress metabolico e ossidativo. La neuroglobina è stata collegata alla funzione mitocondriale, al tamponamento delle specie reattive dell’ossigeno e alla modulazione di vie di segnalazione associate all’apoptosi che influenzano la sopravvivenza neuronale. Le variazioni nell’espressione di **Ngb** sono state studiate nel contesto delle risposte a ipossia/ischemia e di programmi di stress rilevanti per la neurodegenerazione, rendendolo un nodo utile per analizzare i meccanismi di rilevamento dell’ossigeno e di adattamento allo stress nel sistema nervoso. Nei modelli sperimentali, la perturbazione di **Ngb** aiuta a chiarire come la disponibilità di ossigeno si interfacci con la bioenergetica mitocondriale e con la trascrizione regolata dal redox.

neuroglobin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ngb senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

neuroglobin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ngb nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ngb, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di neuroglobin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ngb nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da neuroglobin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via neuroglobin nelle cellule tumorali con espressione di Ngb silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.