NEIL1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403778

Panoramica

NEIL1 (endonucleasi VIII-like 1) è una DNA glicosilasi/AP liasi che avvia la riparazione per escissione di basi (BER) riconoscendo ed eliminando lesioni ossidative del DNA, incluse pirimidine danneggiate, e processando i siti abasici per favorire l’incisione del filamento. Opera nei percorsi di risposta allo stress ossidativo e di mantenimento del genoma, coordinandosi con gli enzimi BER a valle per ripristinare l’integrità del DNA durante replicazione e trascrizione. L’attività di NEIL1 influenza l’accumulo di mutazioni e la stabilità cromosomica, collegando la sua disregolazione ai meccanismi alla base della carcinogenesi e di altri disturbi associati al danno ossidativo del DNA. In quanto fattore di riparazione nucleare, NEIL1 è spesso studiata nel contesto della riparazione associata alla replicazione, della stabilità del genoma mitocondriale e nucleare e delle risposte cellulari alle specie reattive dell’ossigeno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NEIL1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NEIL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NEIL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NEIL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NEIL1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NEIL1 per lo studio della segnalazione di NEIL1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NEIL1 critici per la funzione di NEIL1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NEIL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NEIL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NEIL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NEIL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NEIL1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NEIL1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NEIL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NEIL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.