Nectin 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401994-ACT

NECTIN2 codifica la nectina-2 (CD112), una molecola di adesione cellulare di tipo immunoglobulinico concentrata nelle giunzioni aderenti, dove media contatti cellula‑cellula indipendenti dal Ca2+ tramite interazioni omofiliche ed eterofiliche. Interagendo con afadina (AF6) e coordinandosi con i complessi cadherina–catenina, la nectina-2 influenza l’assemblaggio delle giunzioni, la polarità epiteliale e il rimodellamento del citoscheletro durante l’organizzazione dei tessuti e la migrazione. La nectina-2 partecipa anche al riconoscimento immunitario come ligando di DNAM-1 (CD226) e TIGIT, collegando la biologia dell’adesione alla segnalazione di cellule NK e T nelle sinapsi immunologiche. Una deregolazione dell’espressione di NECTIN2 è stata associata ad alterati stati di adesione, fenotipi di evasione immunitaria e caratteristiche legate alla progressione in molte neoplasie, a supporto del suo studio nell’ambito delle interazioni tumore–sistema immunitario e della biologia delle barriere.

Nectin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NECTIN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nectin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NECTIN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NECTIN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nectin 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NECTIN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nectin 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nectin 2 nelle cellule tumorali con espressione di NECTIN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.