NDH II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402757-ACT

O DHX9 humano codifica a helicase DExH-box NDH II, uma helicase multifuncional de RNA/DNA que regula a transcrição, o processamento de pré-mRNA, a exportação de mRNA, a tradução e a manutenção da estabilidade do genoma. A NDH II participa do metabolismo de R-loops e resolve ácidos nucleicos estruturados, ligando-a às vias de sinalização da resposta a danos no DNA e ao estresse de replicação. Por meio de interações com complexos ribonucleoproteicos e ácidos nucleicos associados a promotores, o DHX9 pode influenciar programas de expressão gênica da imunidade inata e de resposta ao estresse. Alterações na atividade ou na expressão de DHX9 têm sido associadas a processamento de RNA desregulado e instabilidade ligada à cromatina observados em múltiplos contextos celulares relevantes para doenças, sustentando seu uso como alvo mecanístico em genômica funcional.

NDH II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DHX9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDH II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DHX9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DHX9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDH II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DHX9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDH II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDH II em células tumorais com expressão de DHX9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.